猪痢疾病原分离鉴定 猪大肠杆菌病细菌分离鉴定

1材料与方法： 1.1病料来源：2006年4月长春市郊区某大型养猪场送检的疑似猪痢疾的病、死幼猪若干头，已死亡猪只死亡时间未超过12h。 1.2抹片镜检：以病猪结肠黏膜刮取物或肠内容物与适量生理盐水混合后制成压滴标本片置于暗视野显微镜下（400倍）镜检。 1.3分离培养：采用过滤培养法。用灭菌生理盐水将病猪大肠黏液做5~10倍稀释，轻度离心去沉渣，上清先用大孔径滤膜逐级过滤，滤液再经0.45μm滤膜过滤两次。取滤液直接涂布接种于TSB鲜血琼脂平板上，同时在培养基中加入壮观霉素和万古霉素各200μg,37℃~38℃严格厌氧培养3d，当培养基上出现无菌落的β型溶血区时，挑取溶血区内小块琼脂另做纯培养，每隔2d移植1次，共移植3次，对得到的纯培养物做镜检。 1.4致病力鉴定试验：采用动物感染试验。购自长春生物制品所的2周龄豚鼠和3周龄昆明系小鼠各20只，各取10只灌服待检菌的新鲜培养液，菌液浓度为5×108菌/mL，每次灌服1mL，另外的20只豚鼠和小鼠分别做对照试验。 1.5药敏试验：药敏试纸购自北京天坛药物生物技术开发公司。将药敏试纸放于琼脂平板上37℃~38℃严格厌氧培养48h，结果判断依据《纸片法抗菌药物敏感试验操作标准（第四版）》进行。 2结果： 2.1病猪及病死猪病理剖检变化：病死猪极度消瘦，被毛为粪便污染。病变主要在结肠和盲肠，回盲瓣存在明显分界。急性型病猪的大肠壁和肠系膜充血、水肿，淋巴滤泡增大，肠黏膜肿胀并附有黏液、血块和纤维性渗出物。慢性型病猪可见大肠黏膜呈出血性纤维素性炎症，黏膜表层坏死，形成黏液纤维蛋白性假膜，外观呈麸皮样或豆腐渣样。其他脏器无明显变化。组织学观察可见大肠黏膜层有炎症反应，在肠腔表面和腺窝内可见到数量不一的猪痢疾蛇形螺旋体。 2.2抹片镜检：暗视野显微镜下观察可见大量活菌体，呈蛇样活泼运动。菌体长约6~8μm，有3~5个疏卷曲，两端尖锐，形似双燕翅状。 2.3分离培养：被检样品在TSB培养基上培养2d后，在培养基上形成扁平、半透明、针尖状、强β型溶血性菌落，其纯培养菌落抹片镜检所见结果同2.2。 2.4致病力鉴定试验：灌服菌液3周内，大约一半的豚鼠和小鼠发生下痢和肠道疾病，而对照组动物未见发病。 2.5药敏试验：此次分离的菌株对痢菌净、丁胺卡那霉素、杆菌肽敏感；对庆大霉素、诺氟沙星、氯霉素、链霉素、四环素等稍敏感；对青霉素、环丙沙星、氨苄西林、土霉素、红霉素等几乎不敏感。 3讨论 近年来，在猪养殖过程中，为了防控一些细菌感染，在饲料添加剂及治疗中盲目使用一些抗菌药物，导致耐药菌株越来越多并日趋严重。发生该病时，有条件的应根据药敏试验结果，选择敏感药物进行治疗，且应注意交替用药，按疗程投药，这样才能收到较好的治疗效果。本病目前尚无疫苗可供预防，药物治疗虽可控制猪群的发病率、减少死亡，但停药后极易复发，在猪群中较难根除，只有采取综合性预防措施并配合药物防治才能有效地控制或消灭该病。（1）禁止从疫区引进种猪，必须引进时应进行严格检疫，并至少隔离观察1个月。（2）对无病猪群应加强饲养管理和清洁卫生，实行“全进全出”的育肥制度；发病猪数量多、流行面广且难以全群淘汰时，对猪群采用药物治疗，并结合（过氧乙酸、新洁尔灭、NaOH溶液等消毒）、隔离、合理处理粪尿等措施，可有效降低猪群的发病率。